產品概述：儲存條件 -20℃ 避光保存，有效期見外包裝。開封后，保存溫度詳見說明書。 產品介紹 細胞增殖檢測是評估細胞健康程度、遺傳毒性及抗腫瘤藥物效果的基礎實驗手段。檢測細胞增殖最精確的方法是BrdU 法。EdU 法檢測試劑盒是 BrdU 法的革命性突破。EdU（5-乙炔基-2’-脫氧尿苷）是一種嘧啶類似物，在 DNA 合成期整合入 DNA 雙鏈。EdU 法檢測基于“點擊”反應，一種由銅催化的疊氮化合物和炔烴作用發(fā)生共價反應，形成共價鍵。 本試劑盒中，EdU 含有炔烴，YF?488/555/647A Azide 染料含有疊氮化合物。點擊法的 EdU 標記增殖快速有效，易于使用。BrdU 方法需要 DNA 變性（如酸變性、熱變性或者用 DNase 消化）暴露出 BrdU，從而方便 BrdU 抗體結合；而EdU 法只需標準化的多聚甲醛固定和 Triton X-100 促滲就可以使檢測試劑進入細胞，只需少量的疊氮化染料即可非常有效地標記出整合的 EdU。 本試劑盒包含EdU法檢測所需要的所有組分，可以用于體外培養(yǎng)細胞的增殖檢測。
說明書：
UE-C6016S/C6016M/C6016L/C6016XL 常見問題解答：◆YF?488/555/594/647有什么區(qū)別？
主要就是檢測EDU的物質帶的熒光基團不同，檢測時發(fā)射熒光的顏色不同。實驗效果相同，可根據(jù)偏好或需求進行選擇。◆EdU試劑盒中，固定后3% BSA in PBS的作用是什么？清洗步驟中，BSA可以終止掉未反應的甲醛。◆能否在活細胞中進行Click-iT EdU檢測？不可以。雖然EdU是對活細胞進行代謝標記，但是疊氮化物檢測試劑和緩沖液組分是細胞非透過型，檢測信號時的Click反應必須在固定和通透的樣品上進行。◆質粒轉染表達的熒光蛋白檢測與Click反應兼容嗎？檢測順序是什么？本產品會影響GFP、RFP、mCherry等熒光蛋白的熒光，故染色后無法直接檢測GFP，建議使用GFP抗體間接檢測。◆觀測到較高的本底干擾，這是什么原因所致？如何減少本底干擾？疊氮化物和炔烴類間Click反應非常有選擇性，生物體內幾乎不可能有副反應發(fā)生，所以本底較高一般是由洗滌不充分造成的。減少本底干擾的最佳方法是增加BSA洗滌的次數(shù)。同時，也可在同樣的檢測條件下設置一組同等處理的無染料或無Click反應對照，以排除自發(fā)熒光干擾。此外，您還可在無EdU 體系中進行完整的Click反應，驗證Click反應信號的特異性。◆為什么標記樣品無信號或特異性信號非常低？如何提高信號？1.請保證試劑使用時為無色的狀態(tài)，不要使用已經變黃的添加劑或緩沖液；2.為確保Click反應試劑能夠到達核內，細胞需要充分地固定和通透；3.由于銅離子能結合到部分試劑上，這會導致催化Click反應的有效濃度降低。所以在Click反應前，不要在任何緩沖液或試劑中引入金屬螯合劑（例如EDTA、EGTA、檸檬酸鹽等），對某些含有這些物質的實驗樣品來說，進行Click反應前，可能需要增加額外的洗滌步驟；4.當銅離子在合適的化合價時，Click反應才有效。Click反應中用到的銅離子為二價銅(Cu2+)。5.延長Click反應的時間至超過30分鐘也并不會提高信號。建議使用新鮮的Click反應試劑再次進行30分鐘的孵育，可更有效地提高標記效率。◆如何對細胞核進行復染？試劑盒中配有Hoechst 33342，可以在Click反應后用于細胞核的染色，也可選擇使用DAPI。◆可以用于檢測植物細胞核內的DNA復制嗎?可以。EdU是小分子，可以穿透植物細胞的細胞壁。
使用本產品的文獻：參考文獻1.A rapid and robust assay for detection of S-phase cell cycle progression in plant cells and tissUEs by using ethynyl deoxyuridine應用方向：植物細胞2.A rapid non-radioactive techniqUE for measurement of repair synthesis in primary human fibroblasts by incorporation of ethynyl deoxyuridine (EdU)應用方向：DNA修復3.Chick Embryo Proliferation Studies Using EdU Labeling應用方向：EdU（動物）細胞增殖檢測4.Visualization of Mitochondrial DNA Replication in Individual Cells by EdU Signal Amplification應用方向：線粒體活性檢測5.A method for evaluating the host range of bacteriophages using phages fluorescently labeled with 5-ethynyl-2′-deoxyuridine (EdU)應用方向：細胞成像&細胞流式6.Human cytomegalovirus UL44 concentrates at the periphery of replication compartments, the site of viral DNA synthesis應用方向：病毒活性檢測7.Labeling and Tracking of Mesenchymal Stem Cells with EdU應用方向：細胞標記示蹤
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