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螞蟻淘/Firefly Luciferase Assay Kit(螢火蟲螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒)/50T/F6024M
  • 螞蟻淘/Firefly Luciferase Assay Kit(螢火蟲螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒)/50T/F6024M

螞蟻淘/Firefly Luciferase Assay Kit(螢火蟲螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒)/50T/F6024M

價(jià)格: ¥516.00 市場(chǎng)價(jià): 860.00

貨號(hào): F6024M
品牌: ebiomall
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  • 使用說明
  • 常見問題
    • 產(chǎn)品概述:

      儲(chǔ)存條件-80℃保存。螢火蟲螢光素酶檢測(cè)液(B+C)混合液不可反復(fù)凍融,建議進(jìn)行小批量分裝,并于-20℃(最長(zhǎng)可儲(chǔ)存1個(gè)月)或-80℃(最長(zhǎng)可儲(chǔ)存1年)條件下儲(chǔ)存。有效期見外包裝。

      組分

      規(guī)格

      F6024S(20T)

      F6024M(50T)

      F6024L(200T)

      F6024XL(1000T)

      A. 5×FireflyLuciferaseLysis Buffer

      2×1mL

      5mL

      20mL

      100mL

      B. FireflyLuciferase Assay Buffer

      2×1mL

      5mL

      20mL

      100mL

      C. D-Luciferin

      0.4 mg

      1 mg

      4 mg

      20 mg

      產(chǎn)品介紹真核基因表達(dá)調(diào)控研究常用的方法是進(jìn)行報(bào)告基因的檢測(cè),生物發(fā)光法又是報(bào)告基因檢測(cè)最常用的有效手段。螢光素酶能催化底物螢光素的轉(zhuǎn)化,并發(fā)射出光子。該產(chǎn)品為螢火蟲螢光素酶報(bào)告基因在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的表達(dá)提供快速、靈敏、穩(wěn)定的檢測(cè)方法。能夠檢測(cè)最低10-20mol的螢光素酶,在10-14至10-20mol的酶濃度范圍內(nèi)呈很好的線性關(guān)系。產(chǎn)品特點(diǎn)1. 快速:細(xì)胞裂解在10-15 min內(nèi)完成。2. 方便:試劑易于配制,樣品檢測(cè)步驟簡(jiǎn)單。3. 靈敏:能夠檢測(cè)最低10-20mol的螢光素酶。4. 酶的濃度線性范圍可達(dá)8個(gè)數(shù)量級(jí)。注意事項(xiàng)1. 溫度會(huì)對(duì)酶的活性產(chǎn)生影響,因此所有試劑應(yīng)放置室溫后再使用。2. 如果單管熒光測(cè)定儀測(cè)定,每個(gè)樣品與測(cè)定試劑混合后到測(cè)定前的時(shí)間應(yīng)保持一致。3. 螢火蟲螢光素酶催化的生物發(fā)光的最強(qiáng)波長(zhǎng)為560 nm。4. 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

      說明書:UE-F6024S/F6024M/F6024L/F6024XL
      常見問題解答:◆檢測(cè)的螢光數(shù)值很低怎么辦?

      (1)可能為轉(zhuǎn)染效率低a.優(yōu)化轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)條件,用較易轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒做陽性對(duì)照(如轉(zhuǎn)染過表達(dá)熒光蛋白質(zhì)粒);b.確保轉(zhuǎn)染DNA的質(zhì)量,可通過酶切或瓊脂糖凝膠電泳的方法對(duì)DNA質(zhì)量進(jìn)行鑒定;c.選擇活性較高,處于指數(shù)分裂期的細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染。(2)可能為啟動(dòng)子活性低或誘導(dǎo)失敗a.轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞培養(yǎng)使用特異性誘導(dǎo)啟動(dòng)子的條件;b.優(yōu)化細(xì)胞的培養(yǎng)條件,提高螢光素酶的表達(dá)量;c.更換強(qiáng)啟動(dòng)子(如SV40、CMV)。注:海腎螢光素酶基因作為內(nèi)對(duì)照,其表達(dá)應(yīng)不受時(shí)期、部位、環(huán)境影響,因此常用組成型表達(dá)的TK啟動(dòng)子。(3)樣品裂解效率低a.細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間不宜過長(zhǎng),12-36h內(nèi)最好,長(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng)后,細(xì)胞可能會(huì)難裂解。b.加入的裂解液需足量,保證細(xì)胞能夠充分裂解。(4)檢測(cè)過程操作不規(guī)范a.選擇合適的檢測(cè)儀器,能夠檢測(cè)化學(xué)發(fā)光或者生物發(fā)光的儀器都適用于該實(shí)驗(yàn);b.需加入足量底物,保證底物的飽和,否則會(huì)造成檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)很大偏差;c.室溫反應(yīng)。反應(yīng)時(shí)各個(gè)組分(細(xì)胞裂解產(chǎn)物,底物工作液等)都需要調(diào)整到室溫;d.螢光素酶的半衰期一般約30min,加完底物后可立即檢測(cè),盡量在30min內(nèi)完成。(5)底物氧化失效a.底物避光密封保存,螢火蟲熒光素酶底物-20℃保存;海腎螢光素酶底物推薦-80℃保存;b.反應(yīng)工作液建議現(xiàn)用現(xiàn)配。◆進(jìn)行檢測(cè)的過程中,螢光信號(hào)值太高該如何進(jìn)行調(diào)整?(1) 減少質(zhì)粒轉(zhuǎn)染量。(2)細(xì)胞樣品裂解后,離心取上清后檢測(cè)或?qū)α呀猱a(chǎn)物進(jìn)行稀釋后檢測(cè)。注:不建議通過減少底物量來降低熒光值,需要保證底物的飽和來反映螢光素酶真實(shí)的表達(dá)水平,否則會(huì)造成檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)大的偏差。

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