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螞蟻淘/Dualucif<sup>TM</sup> Firefly & Renilla Assay Kit(雙螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒)/100T/F6075M
  • 螞蟻淘/Dualucif<sup>TM</sup> Firefly & Renilla Assay Kit(雙螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒)/100T/F6075M

螞蟻淘/DualucifTM Firefly & Renilla Assay Kit(雙螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒)/100T/F6075M

價(jià)格: ¥1105.00 市場(chǎng)價(jià): 1841.67

貨號(hào): F6075M
品牌: ebiomall
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  • 常見問題
    • 產(chǎn)品概述:

      儲(chǔ)存條件

      -80℃保存。將 C 組分溶解到 B 組分后,該混合液不可反復(fù)凍融,建議進(jìn)行小批量分裝,并于-20℃(最長(zhǎng)可儲(chǔ)存 1 個(gè)月)或-70℃(最長(zhǎng)可儲(chǔ)存 1 年)條件下儲(chǔ)存。Renilla Luciferase Assay solution(D+E)應(yīng)新鮮配制,當(dāng)天使用。有效期見外包裝。

      組分

      規(guī)格

      F6075S(20T)

      F6075M(100T)

      F6075L(1000T)

      A.5× PassiveLuciferase Lysis Buffer

      2×1mL

      10 mL

      100 mL

      B.FireflyLuciferase Assay Buffer

      2×1mL

      10 mL

      100 mL

      C.D-Luciferin

      0.4 mg

      2 mg

      20 mg

      D.RenillaLuciferase Assay Buffer

      2×1mL

      10 mL

      100 mL

      E.50×Coelenterazine

      40 μL

      200 μL

      2×1mL

      產(chǎn)品介紹DualucifTMFirefly & Renilla Assay Kit(雙螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒)為檢測(cè)基因的表達(dá)量提供有效的手段,在 DLR檢測(cè)中,螢火蟲螢光素酶(Firefly luciferase)和海腎螢光素酶(Renilla luciferase)的活性可在單個(gè)樣品中依次檢測(cè)。先以螢光素(Luciferin)為底物來檢測(cè)螢火蟲螢光素酶的活性,然后加入抑制螢火蟲螢光素酶催化的物質(zhì),同時(shí)加入腔腸素(Coelenterazine)檢測(cè)海腎螢光素酶的活性,實(shí)現(xiàn)雙螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)。通過螢光素酶和其底物這一生物發(fā)光體系,可以非常靈敏、高效地檢測(cè)基因的表達(dá)。通常把感興趣基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件或5" 啟動(dòng)子區(qū)克隆在Luciferase的上游,或把3"-UTR 區(qū)克隆在Luciferase的下游,構(gòu)建成報(bào)告基因(Reporter gene)質(zhì)粒,然后轉(zhuǎn)染細(xì)胞,用適當(dāng)藥物等處理細(xì)胞后裂解細(xì)胞,通過檢測(cè)螢光素酶活性的高低來判斷藥物處理等對(duì)目的基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用。海腎螢光素酶更多地被用作檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率的內(nèi)參,以消除細(xì)胞數(shù)量和轉(zhuǎn)染效率的差異。
      螢火蟲螢光素酶是一種分子量約為61 kD 的蛋白,在ATP、鎂離子和氧氣存在的條件下,可以催化螢光素生成氧化螢光素(Oxyluciferin),在螢光素被氧化的過程中,會(huì)產(chǎn)生光信號(hào)。海腎螢光素酶是一種分子量約為36 kD的蛋白,在氧氣存在的條件下,可以催化腔腸素氧化成腸酰胺(Coelenteramide),在腔腸素氧化的過程中也會(huì)產(chǎn)生光信號(hào)。本試劑盒的光信號(hào)可以通過化學(xué)發(fā)光儀、酶標(biāo)儀或液閃測(cè)定儀進(jìn)行測(cè)定。該試劑盒具有檢測(cè)迅速、靈敏度高、檢測(cè)范圍廣,無細(xì)胞內(nèi)源活性干擾等特點(diǎn)。

      注意事項(xiàng)1. 為取得最佳測(cè)定效果,在用單管的化學(xué)發(fā)光儀測(cè)定時(shí),樣品和測(cè)定試劑混合后到測(cè)定前的時(shí)間應(yīng)盡量控制一致;使用具有化學(xué)發(fā)光測(cè)定功能的多功能熒光酶標(biāo)儀時(shí),宜先把樣品全部加好,然后統(tǒng)一加入螢火蟲螢光素酶檢測(cè)試劑。2. 由于溫度對(duì)酶反應(yīng)有影響,所以測(cè)定時(shí),樣品和試劑均需達(dá)到室溫后再進(jìn)行測(cè)定。3. 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
      說明書:UE-F6075S/F6075M/F6075L
      MSDS:MSDS F6075 Dual Luciferase Assay Kit
      常見問題解答:◆雙螢光素酶報(bào)告基因最適反應(yīng)溫度?

      室溫(20-22℃)。反應(yīng)時(shí)各個(gè)組分(細(xì)胞裂解產(chǎn)物,底物工作液等)都需要調(diào)整到室溫。此兩種螢光素酶的反應(yīng)速率是受溫度影響的,為了保證實(shí)驗(yàn)的一致性,我們推薦此兩種工作液在檢測(cè)時(shí)都孵育至室溫。◆雙螢光素酶報(bào)告基因載體該如何選擇?(1)螢火蟲報(bào)告基因質(zhì)粒原則上含有l(wèi)uc基因就可以,但是不同實(shí)驗(yàn)所需的載體有一定差異,如果您要自己構(gòu)建載體,要注意有些載體沒有啟動(dòng)子,需要自行插入啟動(dòng)子,如pGL3 Basic。(2)海腎報(bào)告基因質(zhì)粒盡量選擇中等強(qiáng)度的啟動(dòng)子,如TK啟動(dòng)子等,不要選擇強(qiáng)啟動(dòng)子CMV、SV40等。海腎基因的表達(dá)活性應(yīng)顯著高于背景組,同時(shí)不干擾螢火蟲螢光素酶報(bào)告基因的表達(dá)。。◆檢測(cè)的螢光數(shù)值很低怎么辦?(1)可能為轉(zhuǎn)染效率低a.優(yōu)化轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)條件,用較易轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒做陽(yáng)性對(duì)照(如轉(zhuǎn)染過表達(dá)熒光蛋白質(zhì)粒);b.確保轉(zhuǎn)染DNA的質(zhì)量,可通過酶切或瓊脂糖凝膠電泳的方法對(duì)DNA質(zhì)量進(jìn)行鑒定;c.選擇活性較高,處于指數(shù)分裂期的細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染。(2)可能為啟動(dòng)子活性低或誘導(dǎo)失敗a.轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞培養(yǎng)使用特異性誘導(dǎo)啟動(dòng)子的條件;b.優(yōu)化細(xì)胞的培養(yǎng)條件,提高螢光素酶的表達(dá)量;c.更換強(qiáng)啟動(dòng)子(如SV40、CMV)。注:海腎螢光素酶基因作為內(nèi)對(duì)照,其表達(dá)應(yīng)不受時(shí)期、部位、環(huán)境影響,因此常用組成型表達(dá)的TK啟動(dòng)子。(3)樣品裂解效率低a.細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間不宜過長(zhǎng),12-36h內(nèi)最好,長(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng)后,細(xì)胞可能會(huì)難裂解。b.加入的裂解液需足量,保證細(xì)胞能夠充分裂解。(4)檢測(cè)過程操作不規(guī)范a.選擇合適的檢測(cè)儀器,能夠檢測(cè)化學(xué)發(fā)光或者生物發(fā)光的儀器都適用于該實(shí)驗(yàn);b.需加入足量底物,保證底物的飽和,否則會(huì)造成檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)很大偏差;c.室溫反應(yīng)。反應(yīng)時(shí)各個(gè)組分(細(xì)胞裂解產(chǎn)物,底物工作液等)都需要調(diào)整到室溫;d.螢光素酶的半衰期一般約30min,加完底物后可立即檢測(cè),盡量在30min內(nèi)完成。(5)底物氧化失效a.底物避光密封保存,螢火蟲螢光素酶底物-20℃保存;海腎螢光素酶底物推薦-80℃保存;b.反應(yīng)工作液建議現(xiàn)用現(xiàn)配。

      使用本產(chǎn)品的文獻(xiàn):參考文獻(xiàn)1.DDX3 Activates CBC-eIF3-Mediated Translation of uORF-Containing Oncogenic mRNAs to Promote Metastasis in HNSCC.應(yīng)用方向:基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控檢測(cè)2.Glucose starvation induces LKB1-AMPK-mediated MMP-9 expression in cancer cells.應(yīng)用方向:基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控檢測(cè)3.Repression of MAP3K1 expression and JNK activity by canonical Wnt signaling.應(yīng)用方向:基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控檢測(cè)4.The cellular stress proteins CHCHD10 and MNRR1 (CHCHD2): Partners in mitochondrial and nuclear function and dysfunction.應(yīng)用方向:基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控檢測(cè)5.Large-Scale Screening of Natural Products Transactivating Peroxisome Proliferator-Activated Receptor α Identifies 9S-Hydroxy-10E,12Z,15Z-Octadecatrienoic Acid and Cymarin as Potential Compounds Capable of Increasing Apolipoprotein A-I Transcription in Human Liver Cells.應(yīng)用方向:基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控檢測(cè)
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