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螞蟻淘/Dualucif<sup>TM</sup> Firefly & Renilla Assay Kit（雙螢光素酶報告基因檢測試劑盒）/20T/F6075S
  • 螞蟻淘/Dualucif<sup>TM</sup> Firefly & Renilla Assay Kit（雙螢光素酶報告基因檢測試劑盒）/20T/F6075S

螞蟻淘/DualucifTM Firefly & Renilla Assay Kit（雙螢光素酶報告基因檢測試劑盒）/20T/F6075S

價格: ￥286.00 市場價: 476.67
貨號: F6075S
品牌: ebiomall
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  • 使用說明
  • 常見問題
    • 產(chǎn)品概述：

      儲存條件

      -80℃保存。將 C 組分溶解到 B 組分后，該混合液不可反復(fù)凍融，建議進(jìn)行小批量分裝，并于-20℃（最長可儲存 1 個月）或-70℃（最長可儲存 1 年）條件下儲存。Renilla Luciferase Assay solution（D+E）應(yīng)新鮮配制，當(dāng)天使用。有效期見外包裝。

      組分

      規(guī)格

      F6075S（20T）

      F6075M（100T）

      F6075L（1000T）

      A.5× PassiveLuciferase Lysis Buffer

      2×1mL

      10 mL

      100 mL

      B.FireflyLuciferase Assay Buffer

      2×1mL

      10 mL

      100 mL

      C.D-Luciferin

      0.4 mg

      2 mg

      20 mg

      D.RenillaLuciferase Assay Buffer

      2×1mL

      10 mL

      100 mL

      E.50×Coelenterazine

      40 μL

      200 μL

      2×1mL

      產(chǎn)品介紹DualucifTMFirefly & Renilla Assay Kit（雙螢光素酶報告基因檢測試劑盒）為檢測基因的表達(dá)量提供有效的手段，在 DLR檢測中，螢火蟲螢光素酶（Firefly luciferase）和海腎螢光素酶（Renilla luciferase）的活性可在單個樣品中依次檢測。先以螢光素（Luciferin）為底物來檢測螢火蟲螢光素酶的活性，然后加入抑制螢火蟲螢光素酶催化的物質(zhì)，同時加入腔腸素（Coelenterazine）檢測海腎螢光素酶的活性，實現(xiàn)雙螢光素酶報告基因檢測。通過螢光素酶和其底物這一生物發(fā)光體系，可以非常靈敏、高效地檢測基因的表達(dá)。通常把感興趣基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件或5" 啟動子區(qū)克隆在Luciferase的上游，或把3"-UTR 區(qū)克隆在Luciferase的下游，構(gòu)建成報告基因（Reporter gene）質(zhì)粒，然后轉(zhuǎn)染細(xì)胞，用適當(dāng)藥物等處理細(xì)胞后裂解細(xì)胞，通過檢測螢光素酶活性的高低來判斷藥物處理等對目的基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用。海腎螢光素酶更多地被用作檢測轉(zhuǎn)染效率的內(nèi)參，以消除細(xì)胞數(shù)量和轉(zhuǎn)染效率的差異。
      螢火蟲螢光素酶是一種分子量約為61 kD 的蛋白，在ATP、鎂離子和氧氣存在的條件下，可以催化螢光素生成氧化螢光素（Oxyluciferin），在螢光素被氧化的過程中，會產(chǎn)生光信號。海腎螢光素酶是一種分子量約為36 kD的蛋白，在氧氣存在的條件下，可以催化腔腸素氧化成腸酰胺（Coelenteramide），在腔腸素氧化的過程中也會產(chǎn)生光信號。本試劑盒的光信號可以通過化學(xué)發(fā)光儀、酶標(biāo)儀或液閃測定儀進(jìn)行測定。該試劑盒具有檢測迅速、靈敏度高、檢測范圍廣，無細(xì)胞內(nèi)源活性干擾等特點。

      注意事項1. 為取得最佳測定效果，在用單管的化學(xué)發(fā)光儀測定時，樣品和測定試劑混合后到測定前的時間應(yīng)盡量控制一致；使用具有化學(xué)發(fā)光測定功能的多功能熒光酶標(biāo)儀時，宜先把樣品全部加好，然后統(tǒng)一加入螢火蟲螢光素酶檢測試劑。2. 由于溫度對酶反應(yīng)有影響，所以測定時，樣品和試劑均需達(dá)到室溫后再進(jìn)行測定。3. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
      說明書：UE-F6075S/F6075M/F6075L
      MSDS：MSDS F6075 Dual Luciferase Assay Kit
      常見問題解答：◆雙螢光素酶報告基因最適反應(yīng)溫度？

      室溫（20-22℃）。反應(yīng)時各個組分（細(xì)胞裂解產(chǎn)物，底物工作液等）都需要調(diào)整到室溫。此兩種螢光素酶的反應(yīng)速率是受溫度影響的，為了保證實驗的一致性，我們推薦此兩種工作液在檢測時都孵育至室溫。◆雙螢光素酶報告基因載體該如何選擇？（1）螢火蟲報告基因質(zhì)粒原則上含有l(wèi)uc基因就可以，但是不同實驗所需的載體有一定差異，如果您要自己構(gòu)建載體，要注意有些載體沒有啟動子，需要自行插入啟動子，如pGL3 Basic。（2）海腎報告基因質(zhì)粒盡量選擇中等強(qiáng)度的啟動子，如TK啟動子等，不要選擇強(qiáng)啟動子CMV、SV40等。海腎基因的表達(dá)活性應(yīng)顯著高于背景組，同時不干擾螢火蟲螢光素酶報告基因的表達(dá)。。◆檢測的螢光數(shù)值很低怎么辦？（1）可能為轉(zhuǎn)染效率低a.優(yōu)化轉(zhuǎn)染實驗條件，用較易轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒做陽性對照（如轉(zhuǎn)染過表達(dá)熒光蛋白質(zhì)粒）；b.確保轉(zhuǎn)染DNA的質(zhì)量，可通過酶切或瓊脂糖凝膠電泳的方法對DNA質(zhì)量進(jìn)行鑒定；c.選擇活性較高，處于指數(shù)分裂期的細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染。（2）可能為啟動子活性低或誘導(dǎo)失敗a.轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞培養(yǎng)使用特異性誘導(dǎo)啟動子的條件；b.優(yōu)化細(xì)胞的培養(yǎng)條件，提高螢光素酶的表達(dá)量；c.更換強(qiáng)啟動子（如SV40、CMV）。注：海腎螢光素酶基因作為內(nèi)對照，其表達(dá)應(yīng)不受時期、部位、環(huán)境影響，因此常用組成型表達(dá)的TK啟動子。（3）樣品裂解效率低a.細(xì)胞培養(yǎng)時間不宜過長，12-36h內(nèi)最好，長時間培養(yǎng)后，細(xì)胞可能會難裂解。b.加入的裂解液需足量，保證細(xì)胞能夠充分裂解。（4）檢測過程操作不規(guī)范a.選擇合適的檢測儀器，能夠檢測化學(xué)發(fā)光或者生物發(fā)光的儀器都適用于該實驗；b.需加入足量底物，保證底物的飽和，否則會造成檢測結(jié)果出現(xiàn)很大偏差；c.室溫反應(yīng)。反應(yīng)時各個組分（細(xì)胞裂解產(chǎn)物，底物工作液等）都需要調(diào)整到室溫；d.螢光素酶的半衰期一般約30min，加完底物后可立即檢測，盡量在30min內(nèi)完成。（5）底物氧化失效a.底物避光密封保存，螢火蟲螢光素酶底物-20℃保存；海腎螢光素酶底物推薦-80℃保存；b.反應(yīng)工作液建議現(xiàn)用現(xiàn)配。

      使用本產(chǎn)品的文獻(xiàn)：參考文獻(xiàn)1.DDX3 Activates CBC-eIF3-Mediated Translation of uORF-Containing Oncogenic mRNAs to Promote Metastasis in HNSCC.應(yīng)用方向：基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控檢測2.Glucose starvation induces LKB1-AMPK-mediated MMP-9 expression in cancer cells.應(yīng)用方向：基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控檢測3.Repression of MAP3K1 expression and JNK activity by canonical Wnt signaling.應(yīng)用方向：基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控檢測4.The cellular stress proteins CHCHD10 and MNRR1 (CHCHD2): Partners in mitochondrial and nuclear function and dysfunction.應(yīng)用方向：基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控檢測5.Large-Scale Screening of Natural Products Transactivating Peroxisome Proliferator-Activated Receptor α Identifies 9S-Hydroxy-10E,12Z,15Z-Octadecatrienoic Acid and Cymarin as Potential Compounds Capable of Increasing Apolipoprotein A-I Transcription in Human Liver Cells.應(yīng)用方向：基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控檢測
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