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NEB/MspJI/R0661S/1,000 units

價(jià)格: ￥5160.00 市場(chǎng)價(jià): 8600.00

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貨號(hào): R0661S-1,000units

品牌: NEB

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- Description:
  MspJI,anEpiMark^?,validatedproductisamodification-dependentendonucleasethatrecognizes^mCNNRsitesandgeneratesadouble-strandedDNAbreakonthe3′sideofthemodifiedcytosineatN₉/N₁₃.TherecognizedcytosinemodificationsincludeC5-methylation(5-mC)andC5-hydroxymethylation(5-hmC)(1).
  
  ThisenzymeisprovidedwithanEnzymeActivatorSolutionwhichmaybeusedforefficientdigestionbyMspJI.
  
  ThemostcommonepigeneticmodificationsfoundineukaryoticorganismsaremethylationmarksatCpGorCHGsites.AsubsetofthesemodifiedsitesarerecognizedandcleavedbyMspJI.
  
  AtfullymethylatedCpGsites:
  5′...YN^mCGNR...3′
  3′...?RNG?^mCN?Y...5′
  
  orCHGsites:
  5′...Y^mC?H?GR...3′
  3′...RGD^mCY...5′
  
  R=AorG
  Y=CorT
  H=AorCorT(notG)
  D=AorGorT(notC)?
  
  MspJIrecognizeseachhemi-methylatedsiteindividuallyandcleavesbidirectionallytogenerate32-baseor31-basefragments,respectively.Thesefragmentscontainthecentralmethylatedsiteandhave4-base5′overhangsateachend.MspJIdoesnotcleaveunmodifiedDNA.
  ProductSource
  AnE.colistrainthatcarriesthesyntheticMspJIgenefromMycobacteriumspeciesJLS.
  ReagentsSupplied
  Thefollowingreagentsaresuppliedwiththisproduct:
  Storeat(°C) Concentration
  CutSmart®Buffer -20 10X
  EnzymeActivatorSolution 30X
  Notes:
  ThisenzymehasbeenusedforepigeneticanalysisinwhichtargetDNAcontainingCpGsitesmethylatedinbothstrandsiscleavedbyMspJItogenerate32bpfragmentscontainingthemethylatedCpGsites.Theisolated32bpfragmentscanbesequencedtoreveal5-mCmodificationsites(Cohen-Karnietal.,(2011)PNAS108:11040-11045).Useofexcessenzymeinhibitscleavage.OptimizationoftheamountofenzymeneededforcompletedigestionmayberequiredforeachsubstrateDNA.Staractivity,includingdigestionofnon-methylatedDNAsubstrates,mayresultfromnon-optimalreactionconditionssuchasextendeddigestiontime,highenzymeoractivatorconcentrationoraglycerolconcentrationof>5%.Optimizationoftheamountofenzymeneededtoachieveefficientspecificcutting,whileavoidingstaractivity,mayberequiredforeachsubstrateDNA.Optimalspecificityofcleavageat5-mCsitescanbeachievedbykeepingthemolarratioofMspJIto5-mCtargetsitesbetween0.1:1to1:1inthepresenceof1XEnzymeActivatorSolutionanddigestingforupto60minutes.(ThemolarityofMspJIis~7.4μM).
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