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產(chǎn)品介紹 Rat IL-10 ELISA Kit (Rat Interleukin-10 Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit) ，即大鼠白細胞介素 10 ELISA 試劑盒，可以定量檢測大鼠血清、血漿或細胞培養(yǎng)上清液等樣本中的天然和重組 IL-10 濃度。白細胞介素 10 是一種多效性細胞因子，可以在多種類型細胞中發(fā)揮免疫抑制或免疫刺激的作用。小鼠，大鼠和人 IL-10 cDNA 序列均含 178 個氨基酸殘基，內含 18 個氨基酸殘基的信號肽序列。成熟 IL-10 分子為 160 氨基酸殘基，小鼠和人 IL-10 分子中分別含 5 個和 4 個半胱氨酸殘基，分子量為 35-40 kDa。在氨基酸水平上，大鼠 IL-10 與人和小鼠 IL-10 分別有 85％和 74％的同源性。大鼠和人 IL-10 可作用于小鼠源性細胞，而小鼠 IL-10 對人的細胞則無交叉反應。IL-10 可以抑制小鼠 Th1 細胞的增殖以及 IL-2、IL-3、IFN-γ、TNF 以及 GM-CSF 等細胞因子合成；有效調節(jié)單核 /巨噬細胞功能；促進肥大細胞和胸腺細胞增殖；協(xié)同 IL-2 誘導 ConA 活化脾細胞中 CTL 前體細胞(CTLp)分化為成熟的 CTL；提高 B 細胞的存活率，促進 B 細胞的增殖、MHCⅡ 類抗原表達以及 Ig 的分泌，并與 Th2 所產(chǎn)生的 IL-4、IL-5 有協(xié)同作用；抑制 NK 細胞因子的產(chǎn)生等。IL-10 的拮抗劑可能具有抗 EB 病毒的作用；而 IL-10 通過促進單核細胞表達 IL-1ra 有可能成為抗炎癥的治療手段，動物實驗表明， IL-10 可有效地避免 LPS 誘導小鼠休克而造成的死亡。本試劑盒采用雙抗體夾心 ELISA 法檢測樣品中大鼠 IL-10 濃度。在大鼠 IL-10 單克隆抗體預包被酶標板中加入適度稀釋的樣品和標準品，其中的 IL-10 會與其單抗結合，洗去游離成分；加入生物素化的抗大鼠 IL-10 抗體，抗大鼠 IL-10 抗體與結合在單抗上的大鼠 IL-10 結合而形成免疫復合物，洗去游離的成分；加入辣根過氧化物酶標記的親合素，生物素與親合素特異性結合，洗去未結合的酶結合物；加入顯色劑，若反應孔中有 IL-10，辣根過氧化物酶會使無色的顯色劑出現(xiàn)藍色；加終止液變?yōu)辄S色。在 450 nm 下測 OD 值，大鼠 IL-10 濃度與 OD 450 值之間呈正比，可通過繪制標準曲線計算出樣品中大鼠 IL-10 濃度。
UE-R6154S/R6154M/R6154L◆沒有信號？1.試劑添加順序錯誤或試劑配制不正確。重復實驗；檢查試劑配制方法；復核試驗試劑添加流程。2.HRP被疊氮化合物污染。使用新鮮配制的試劑。3.抗體用量不足。檢查是否使用了推薦的抗體量；增加抗體用量（濃度）。4.使用了含胎牛血清的緩沖液復溶抗體。檢查使用的試劑。5.捕獲抗體與板結合較差。使用ELISA板，而非組織培養(yǎng)板；使用不含其他雜蛋白的PBS溶解抗體。6.緩沖液受污染。新鮮配置緩沖液。◆整塊板呈現(xiàn)規(guī)則藍色？1.洗板不充分或跳過洗滌步驟未去除殘留的非結合過氧化物酶。嚴格按照說明書洗滌流程操作。2.底物溶液預混太早不新鮮。底物溶液混合后須立即使用。3.封板膠紙或試劑儲液槽重復使用導致HRP殘留污染。每步均需使用新的封板膠紙或試劑儲液槽。4.緩沖液有金屬或HRP污染。新鮮配置緩沖液。◆標準曲線差？1.鏈親和素-HRP結合物量不足。檢查倍性稀釋是否正確。2.捕獲抗體與板結合較差。使用酶標板，而非組織培養(yǎng)板；使用不含其他雜蛋白的PBS溶解抗體。3.檢測抗體量不足。檢查稀釋度是否正確。4.孵育時間不足。延長底物溶液孵育時間。5.實驗操作流程有誤。嚴格按照說明書操作流程。6.標準曲線稀釋計算錯誤。重新計算制作新的標準曲線。
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