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產品介紹 Rat IL-6 ELISA Kit (Rat Interleukin-6 Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit) ，即大鼠白細胞介素 6 ELISA 試劑盒，可以定量檢測大鼠血清、血漿或細胞培養(yǎng)上清液等樣本中的天然和重組 IL-6 濃度。 白細胞介素6是一種由淋巴、非淋巴細胞產生的多功能細胞因子。IL-1、TNF、IFN-β、PDGF、LPS、PolyⅠ-C、A 23187和PMA等對IL-6的產生具有正調節(jié)作用。大鼠IL-6的 cDNA序列有211個氨基酸殘基，含有兩個潛在的N糖基化位點。成熟大鼠IL-6由疏水N末端24個氨基酸殘基信號肽裂解產生，含187氨基酸殘基。小鼠、大鼠和人的IL-6 cDNA序列克隆均已獲得。在蛋白質序列水平上，大鼠IL-6與人IL-6 具有39％的同源性，與小鼠IL-6有87%相同。人的IL-6對小鼠某些細胞有刺激作用，但小鼠的IL-6對人的細胞沒有活性。IL-6與G-CSF和IFN-β有較高同源性，對骨髓造血細胞和髓樣白血病細胞的某些作用也有相似之處。 IL-6 由多種細胞產生，對免疫應答、急性期反應、造血和神經系統(tǒng)有多方面作用。IL-6 的生物學活性主要包括調節(jié)免疫應答、調節(jié)造血系統(tǒng)、誘導急性期蛋白、調節(jié)腫瘤生長、調節(jié)神經內分泌系統(tǒng)和其它等 6 個方面。IL-6 與臨床上多種疾病的發(fā)生均有關系。與自身免疫性疾病，腫瘤均有密切的關系。IL-1 和 TNF-α對 IL-6 引起的病理損傷可能有協(xié)同作用。應用 IL-6 治療放療、化療所致血小板減少癥，癌癥以及作為疫苗佐劑已進入臨床試驗。 本試劑盒采用雙抗體夾心 ELISA 法檢測樣品中大鼠 IL-6 濃度。在大鼠 IL-6 單克隆抗體預包被酶標板中加入適度稀釋的樣品和標準品，其中的 IL-6 會與其單抗結合，洗去游離成分；加入生物素化的抗大鼠 IL-6 抗體，抗大鼠 IL-6 抗體與結合在單抗上的大鼠 IL-6 結合而形成免疫復合物，洗去游離的成分；加入辣根過氧化物酶標記的親合素，生物素與親合素特異性結合，洗去未結合的酶結合物；加入顯色劑，若反應孔中有 IL-6，辣根過氧化物酶會使無色的顯色劑出現(xiàn)藍色；加終止液變?yōu)辄S色。在 450 nm 下測 OD 值，大鼠 IL-6 濃度與 OD 450 值之間呈正比，可通過繪制標準曲線計算出樣品中大鼠 IL-6 濃度。
UE-R6156S/R6156M/R6156L◆沒有信號？1.試劑添加順序錯誤或試劑配制不正確。重復實驗；檢查試劑配制方法；復核試驗試劑添加流程。2.HRP被疊氮化合物污染。使用新鮮配制的試劑。3.抗體用量不足。檢查是否使用了推薦的抗體量；增加抗體用量（濃度）。4.使用了含胎牛血清的緩沖液復溶抗體。檢查使用的試劑。5.捕獲抗體與板結合較差。使用ELISA板，而非組織培養(yǎng)板；使用不含其他雜蛋白的PBS溶解抗體。6.緩沖液受污染。新鮮配置緩沖液。◆整塊板呈現(xiàn)規(guī)則藍色？1.洗板不充分或跳過洗滌步驟未去除殘留的非結合過氧化物酶。嚴格按照說明書洗滌流程操作。2.底物溶液預混太早不新鮮。底物溶液混合后須立即使用。3.封板膠紙或試劑儲液槽重復使用導致HRP殘留污染。每步均需使用新的封板膠紙或試劑儲液槽。4.緩沖液有金屬或HRP污染。新鮮配置緩沖液。◆標準曲線差？1.鏈親和素-HRP結合物量不足。檢查倍性稀釋是否正確。2.捕獲抗體與板結合較差。使用酶標板，而非組織培養(yǎng)板；使用不含其他雜蛋白的PBS溶解抗體。3.檢測抗體量不足。檢查稀釋度是否正確。4.孵育時間不足。延長底物溶液孵育時間。5.實驗操作流程有誤。嚴格按照說明書操作流程。6.標準曲線稀釋計算錯誤。重新計算制作新的標準曲線。
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