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產(chǎn)品介紹 Swine TNF-α ELISA Kit (Swine Tumor Necrosis Factor-α Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit) ，即豬腫瘤壞死因子α ELISA 試劑盒，可以定量檢測豬血清、血漿或細胞培養(yǎng)上清液等樣本中的天然和重組 TNF-α濃度。 TNF-α是一種主要由單核細胞和巨噬細胞產(chǎn)生的單核因子。豬TNF-α主要由活化的巨噬細胞表達，NK細胞，角質(zhì)形成細胞，血管平滑肌細胞，和顆粒葉黃素細胞等也分泌 TNF-α。豬TNF-α是由232個氨基酸殘基組成的II型膜糖蛋白，含有一個35個氨基酸的胞質(zhì)域，一個21個氨基酸的跨膜結構域和一個178個氨基酸的胞外結構域。 TNF-α的生物學活性非常復雜，包括對造血、免疫和炎癥的調(diào)節(jié)；對血管和凝血的影響和對多種器官（肝、心臟、骨、軟骨、肌肉和其它組織）的作用。如殺傷或抑制腫瘤細胞；提高中性粒細胞的吞噬能力，增加過氧化物陰離子產(chǎn)生，增強 ADCC 功能，刺激細胞脫顆粒和分泌髓過氧化物酶；抗感染；促進髓樣白血病細胞向巨噬細胞分化；促進細胞增殖和分化等。在臨床上，應用 TNF 在治療腫瘤等方面開始臨床Ⅱ期試驗，也可與 IL-2 聯(lián)合治療腫瘤。TNF-α的抗腫瘤作用包括 TNF-α的直接作用和 TNF-α誘導的針對腫瘤的免疫應答。TNF-α參與包括哮喘，Π型糖尿病，Crohn’s 病，和風濕性關節(jié)炎等疾病。TNF 刺激內(nèi)皮細胞，導致炎癥、組織損傷和凝血從而誘發(fā)感染性休克。TNF-α又稱惡液素，可誘發(fā)機體發(fā)生惡液質(zhì)。TNF 還具有類似 IFN 抗病毒作用，阻止病毒早期蛋白質(zhì)的合成，從而抑制病毒的復制，并與 IFN-α和 IFN-γ協(xié)同抗病毒作用。 本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法檢測樣品中豬TNF-α 濃度。在豬TNF-α單克隆抗體預包被酶標板中加入適度稀釋的樣品和標準品，其中的TNF-α會與其單抗結合，洗去游離成分；加入生物素化的抗豬TNF-α抗體，抗豬TNF-α抗體與結合在單抗上的豬TNF-α結合而形成免疫復合物，洗去游離的成分；加入辣根過氧化物酶標記的親合素，生物素與親合素特異性結合，洗去未結合的酶結合物；加入顯色劑，若反應孔中有TNF-α，辣根過氧化物酶會使無色的顯色劑出現(xiàn)藍色；加終止液變?yōu)辄S色。在450 nm下測OD值，豬TNF-α濃度與OD 450值之間呈正比，可通過繪制標準曲線計算出樣品中豬TNF-α濃度。
UE-S6159S/S6159M/S6159L◆沒有信號？1.試劑添加順序錯誤或試劑配制不正確。重復實驗；檢查試劑配制方法；復核試驗試劑添加流程。2.HRP被疊氮化合物污染。使用新鮮配制的試劑。3.抗體用量不足。檢查是否使用了推薦的抗體量；增加抗體用量（濃度）。4.使用了含胎牛血清的緩沖液復溶抗體。檢查使用的試劑。5.捕獲抗體與板結合較差。使用ELISA板，而非組織培養(yǎng)板；使用不含其他雜蛋白的PBS溶解抗體。6.緩沖液受污染。新鮮配置緩沖液。◆整塊板呈現(xiàn)規(guī)則藍色？1.洗板不充分或跳過洗滌步驟未去除殘留的非結合過氧化物酶。嚴格按照說明書洗滌流程操作。2.底物溶液預混太早不新鮮。底物溶液混合后須立即使用。3.封板膠紙或試劑儲液槽重復使用導致HRP殘留污染。每步均需使用新的封板膠紙或試劑儲液槽。4.緩沖液有金屬或HRP污染。新鮮配置緩沖液。◆標準曲線差？1.鏈親和素-HRP結合物量不足。檢查倍性稀釋是否正確。2.捕獲抗體與板結合較差。使用酶標板，而非組織培養(yǎng)板；使用不含其他雜蛋白的PBS溶解抗體。3.檢測抗體量不足。檢查稀釋度是否正確。4.孵育時間不足。延長底物溶液孵育時間。5.實驗操作流程有誤。嚴格按照說明書操作流程。6.標準曲線稀釋計算錯誤。重新計算制作新的標準曲線。
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